crna tačka (Colletotrichum coccodes) je postala ekonomski značajna bolest krtola krompira zbog svoje sposobnosti da izazove rano odumiranje lišća. Bolest koja se zove crna tačka odnosi se na brojne crne mikrosklerotije koje gljiva može proizvesti na svom domaćinu. U avgustu-septembru 2022. godine, simptomi crne tačke su uočeni na c. 48% stabljika krompira (neposredno iznad nivoa tla), c. 27% stolona i c. 22% površine pokožice požnjevenih gomolja na otvorenim poljima [Goodlands (20°04'13.1"S 57°39'37.0"E), Réduit (20°14'00.5"S 57°29'28.5"E) i Plaine Sophie (20°22'23.0“S 57°29'08.4”E)] na Mauricijusu.
Svako od 10 oboljelih tkiva krompira je izrezano na osam malih komada pomoću plamenom sterilizirane bušilice za pluto, koji su zatim površinski dezinficirani 25% izbjeljivačem u trajanju od dvije minute, nakon čega je triput isprano sterilnom destilovanom vodom i na kraju stavljeno na hloramfenikolom s dopunom. ploče s krompir dekstroznim agarom (PDA). Inokulirane ploče su inkubirane na 10°C 10 dana u mraku. Na svim inokuliranim pločama uočene su bijele kolonije s ravnim i hijalinskim micelijama koje su kasnije za 10 dana razvile brojne tamne i sferične sklerocije na koloniji. Čiste kulture su dobijene prenosom vrha hifa u PDA, inkubirane 25 dana na XNUMX°C u mraku i ispitane na morfološke karakteristike. Nakon bojenja pamučnom laktofenol bojom tehnikom čistog slajda, uočeni su brojni, mali, blago suženi i jednoćelijski konidiji srednje dužine i širine (n = 50) od 11.0 i 3.6 μm respektivno.
Patogenost jednog od tri izolata (P200) potvrđena je na šest stabljika i krtola krompira starih 90 dana. Zdravi gomolji krompira su prvobitno površinski sterilisani potapanjem u 2% natrijum hipohlorit na dve minute, isprani dva puta u sterilnoj destilovanoj vodi i ostavljeni da se osuše u sterilizovanom papiru pre nego što su pojedinačno zasejane plastične kese (2 litre). Nakon 45 dana biljke krompira su zalivene sa 50 mL konidijalne suspenzije (106 konidije/ml) izolata P200 pored kragne regije. Neinokulirane biljke krompira služile su kao kontrola i zalijevane su sterilnom destilovanom vodom. Nakon 90 dana, vizuelni pregledi su otkrili simptome crnih tačaka na donjim dijelovima stabljike, blizu površine tla. Ubrani gomolji su imali sive mrlje sa sitnim sklerocijama na površini kože. Kontrolne biljke krompira nisu pokazivale nikakve simptome na stabljikama niti ubranim gomoljima. Originalni izolati su dobijeni iz inokuliranih gomolja, čime su ispunjeni Kochovi postulati. Eksperiment je ponovljen tri puta sa istim rezultatima.
DNK je ekstrahovan iz 10 dana starih kultura tri izolata koristeći CTAB protokol. PCR amplifikacija i sekvenciranje su urađeni sa ITS5/ITS4 i GDF/GDR parovima prajmera za regione internog transkribovanog spejsera (ITS) i regiona gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaze, respektivno. BLASTn pretrage su obavljene sa sekvencama svakog izolata, P86 (ITS: Pristupni br. GenBank OR145915; GADPH: OR232172), P136 (ITS: OR145916; GADPH: OR232173) i P200 (ITS: 145917OR232174). Sve sekvence su imale 99% do 100% identiteta sa preko 100 Colletotrichum coccodes izolati, na primjer 100% identitet sa izolatom BBA 70879 (MT221566.1) za ITS, i 99.66% identitet sa izolatom CBS 112987 (JX546735) za GADPH.
Prema našim saznanjima, ovo je prva prijava crne tačke na krompiru uzrokovane C. kokodovi u Mauricijusu. Nalazi ove studije pomoći će da se poveća svijest o ovom agensu i pomogne savjetodavnim službenicima za poljoprivredu tokom nadzora bolesti na poljima krompira.
Referenca: Takoree, SD, Neetoo, H. & Ranghoo-Sanmukhiya, VM (2023) Prvi izvještaj o Colletotrichum coccodes uzrokujući crnu tačku na krompiru na Mauricijusu. Novi izvještaji o bolestima, 48, e12224. https://doi.org/10.1002/ndr2.12224
